化妆品中马兜铃酸的检测

2.1前言

2.1.1马兜铃酸性质

马兜铃酸是一大类硝基菲类有机酸化合物，包括马兜铃酸 A、B、C、D以及马兜铃内酞胺等等。存在于马兜铃属及细辛属等马兜铃科植物中，而这些植物曾广泛地被中医作为原生药材入药，依靠吸食这类植物生存的蝴蝶体内也有马兜铃酸。

2.1.2马兜铃酸结构

图2-1  马兜铃酸结构式

2.1.3马兜铃酸危害

     马兜铃酸类化合物中，主要的毒性成分为马兜铃酸A或其代谢物马兜铃内酞胺，硝基是马兜铃酸类衍生物中最主要的毒性基团，此外甲氧基和羟基的存在可以使马兜铃酸的毒性进一步加强。另有研究发现，不但马兜铃酸具有很强的肾毒性，其代谢产物马兜铃内酰胺同样具有肾毒性。又通过对马兜铃酸代谢过程及代谢酶的研究证实，马兜铃酸可使RAS基因和P53基因发生突变，进而诱发肿瘤。因此需要对马兜铃酸进行进行检测。

2.1.4检测方法

     大连依利特分析仪器有限公司结合GB/T 35949-2018《化妆品中禁用物质米马兜铃酸A的测定高效液相色谱法》提出了针对膏霜、乳液、化妆水等皮肤护理类化妆品中马兜铃酸A分析的全套解决方案。相关人员可参考本实验中的方法，进行化妆品中马兜铃酸A的测定。

表2-1(a)  EClassical 3100型高效液相色谱系统设备标准配置清单

表2-1(b)  iChrom 5100型高效液相色谱系统设备标准配置清单

注：或同等配置的其他型号的高效液相色谱仪

表2-2 主要化学试剂、标准品清单

表2-3  主要样品前处理设备

实验过程中其它玻璃器皿还包括容量瓶(100mL、50mL、25mL、10mL)、移液枪(0～1000µL，0～5000µL)、移液枪枪头(1mL，5mL)、一次性PVC手套、一次性口罩、进样针、滤膜等若干。

2.3实验方法

2.3.1标准溶液配制

马兜铃酸A标准储备液(100μg/mL)：取马兜铃酸标准品约5mg置于50mL容量瓶中，用甲醇定容。

     马兜铃酸A标准工作液：用流动相配制浓度分别为1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL的马兜铃酸A标准工作液。

2.3.2样品前处理

     称取化妆品约1.0g（精确至0.0001g），置于50mL离心管中，精密加入甲醇10mL，超声提取20min，5000r/min离心15min后，上清液经0.45µm微孔滤膜过滤，备用。

2.3.3色谱条件

     流动相：甲醇:0.5%冰醋酸水溶液=70:30(V:V)

     色谱柱：Supersil ODS2 5μm 4.6×200mm

     流速：1.0mL/min

     检测波长：315nm

     进样量：20µL

     柱温：30℃

2.4实验结果

2.4.1.典型分离色谱图

进样分析浓度为20μg/mL的马兜铃酸A标准工作液，使用2.3.3中的色谱条件，结果如下图所示。

图2-4  马兜铃酸A标准溶液色谱图

表2-4  色谱参数

从以上结果可知，马兜铃酸A分析速度快，不对称度好，柱效高，故该方法适合于马兜铃酸A的分析。

将马兜铃酸A标准工作溶液，按2.3.3中色谱条件进行分析，马兜铃酸的线性方程及检出限如下表所示。

表2-5  线性方程

从上表可知，马兜铃酸A浓度在1.0μg/mL到50μg/mL线性范围内线性相关系数大于0.999。

以3倍信噪比对应的浓度换算为仪器的检出限，以10倍信噪比对应的浓度为仪器的定量限，结果如下表所示。

表2-6  检出限对比

从以上结果可知，本系统的马兜铃酸A检测的灵敏度明符合国标中的要求，即符合检测要求。

2.4.3.方法准确性与重复性

在添加浓度5.0μg/mL~20.0μg/mL的浓度范围内，测得回收率82.3%～90.6%，相对标准偏差为1.3%～2.9%。

表2-7  化妆品中马兜铃酸A方法准确性与重复性结果

2.4.4.实际样品

市场购化妆品，按本文中提到的方法进行了分析，结果如下所示。

图2-5  实际样品谱图

表2-7  实际样品

2.5参考文献

[1]GB/T 35949-2018《化妆品中禁用物质米马兜铃酸A的测定高效液相色谱法》。